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豚鼠ELISA試劑盒標(biao)本(ben)要(yao)求 1.標(biao)本(ben)采集后(hou)(hou)盡早進(jin)行(xing)提取,提取按相關文獻進(jin)行(xing),提取后(hou)(hou)應盡快進(jin)行(xing)實(shi)驗。若不(bu)(bu)能(neng)馬上進(jin)行(xing)試驗,可將標(biao)本(ben)放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不(bu)(bu)能(neng)檢測(ce)含(han)NaN3的樣品(pin),因NaN3抑制辣(la)根過(guo)氧化物酶(mei)的(HRP)活性。
更(geng)新時間:2017-12-09
豚鼠ELISA試劑盒
試劑(ji)盒組(zu)成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止(zhi)液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標(biao)試劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 標準(zhun)品(960μg/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×4條 | 9 | 標準(zhun)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
豚鼠ELISA試劑盒標本要(yao)求(qiu)
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復(fu)凍(dong)融(rong)
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑(ji)盒提供原倍標準品一支(zhi),用戶(hu)可按(an)照下列圖表在小試管中進行稀釋。
480μg/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
240μg/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120μg/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60μg/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30μg/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設空(kong)白孔(空(kong)白對照(zhao)孔不加樣品及酶標(biao)試劑(ji),其余各步操作相同)、標(biao)準孔、待測樣品(pin)孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌(di):小心揭(jie)掉封板膜,棄(qi)去液體(ti),甩干(gan),每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光(guang)顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shi)藍色(se)(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)(se))。
11. 測(ce)定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定(ding)應在(zai)加終止
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀(xi)釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣(yang)品(pin)的實際濃(nong)度。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗(xi)滌液可能(neng)會有(you)結晶析出,稀(xi)釋(shi)時可在水浴中加溫助(zhu)溶,洗滌時不影(ying)響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍(bei)數(×n×5)。
5. 封板膜只限一(yi)次性使用,以避(bi)免交(jiao)叉污(wu)染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。